全球十大死亡原因中头号死亡杀手为心血管疾病。中国心血管患病人数约2.9亿，其中高血压患者占比最大，且年轻化趋势明显[1]。高血压疾病的发病因素不同，但原发性高血压可以借助食物中的某些蛋白质及多肽来进行调控。食物中能起到降血压作用的蛋白质及多肽被称为血管紧张素转换酶(ACE抑制肽)[2]。ACE通过将血管紧张素Ⅰ转换为血管紧张素Ⅱ引起血管收缩，进而使血压升高，ACE抑制肽就是通过抑制血管紧张素的转换过程来降低血压[3]。
我国食用菌产量连年增长，种类繁多，资源丰富。近年的研究发现，食用菌中的功能活性成分可对人体健康产生积极影响，特别是在降血压、抗氧化等方面表现突出。目前，科研人员已证实该活性成分为ACE抑制肽，并对多种食用菌中该物质含量、功效以及提取方法进行了研究[4]。本研究从食用菌源ACE抑制肽的作用机制、制备工艺、活性检测以及构效关系等方面进行综述，以期为进一步研究和开发该物质提供参考。
1 ACE抑制肽的作用机制
生物体的血压调节机制从肾素-血管紧张素系统(RAS)中的血管紧张素元开始。血管紧张素元在肾素的作用下转化成血管紧张素Ⅰ，血管紧张素Ⅰ在血管紧张素转换酶(ACE)的作用下转化成血管紧张素Ⅱ进而引起血管收缩，同时引起醛固酮的释放，作用于远曲小管和集合管，使其增加对Na+和水的吸收，引起血压升高[5]。在激肽释放酶-激肽系统(KKS)中，激肽原在激肽释放酶的作用下转化成激肽，而激肽在ACE的作用下转化成无活性片段使血管收缩、血压升高，而 ACE抑制肽能够将形成的激肽转变成缓激肽进而降低血压[6]。
2 食用菌ACE抑制肽的提取与分离鉴定
2.1 提取方法
2.1.1 水提法 该法是提取食用菌中ACE抑制肽的常用方法[7-11]。稀盐溶液和缓冲液对蛋白质或肽类稳定性好，溶解度大。用水提法提取ACE抑制肽时，应注意控制料水比、pH值和温度等因素，从而显著提高得率[10,11]。研究者多以大白口蘑[7]、蟹味菇[8]、茶树菇[9，10]、灵芝[11]等栽培食用菌和灰树花、双色牛肝菌等野生食用菌为原料，采用水提法得到ACE抑制肽粗提物后进行分离提纯，所得ACE抑制肽提取率较高，降血压效果理想。
2.1.2 硫酸水解法 该法属于酸水解法的一种，是利用不同样品中蛋白质等电点的不同，通过使用硫酸等试剂将样品溶液调至所需蛋白的等电点附近形成沉淀后析出的方法[11，12]。Zhang等[13]以五种蘑菇为原料，采用硫酸水解法制备ACE抑制肽，发现平菇水解物对ACE的抑制效果最好(IC50=64.11 mg/mL)；采用四步纯化法纯化出的ACE抑制肽均表现出良好的抗热、抗酸碱和易于体外消化的特性。
2.1.3 硫酸铵沉淀法 多肽在高浓度盐存在时发生凝聚并析出沉淀，使用高浓度的硫酸铵盐提取ACE抑制肽时，将pH值控制在一定范围内可提高提取率，并通过超滤等操作来分离纯化出ACE抑制肽[14]。Ansor等[15]使用硫酸铵沉淀法制备灵芝中的ACE抑制肽，将沉淀得到的粗蛋白进行反向液相色谱(RP-HPLC)分离ACE抑制肽并检测其活性，结果显示ACE抑制肽抑制率IC50值为1.13 mg/mL。
2.1.4 甲醇提取法 该法属于有机溶剂提取法的一种，可使样品中ACE抑制肽溶解度降低，形成沉淀后析出[16]。Jang等[17]以侧耳菌为原料，以甲醇提取法提取ACE抑制肽，在经过超滤、Sephadex G-25柱层析、连续C18和SCX固相萃取以及反相HPLC纯化后，得到两种纯化的ACE抑制肽，同时对ACE抑制肽的抗血压活性进行了研究，IC50值分别为0.46、1.14 mg/mL，分子量分别为1 622.85、2 037.26 Da，在原发性高血压小鼠体内表现出显著的降血压功效。
2.2 ACE抑制肽的分离鉴定
在进行ACE抑制肽的分离纯化时，通常采用超滤法、凝胶层析法以及高效液相色谱法联用的方式。超滤法是利用超滤膜的孔隙，将不同分子量的物质进行分离[18]。凝胶层析法是利用凝胶颗粒小孔吸附分子质量不同的物质，质量小于凝胶颗粒小孔的被吸附，分子质量大的物质先被洗脱出来，被凝胶吸附的物质后被洗脱，样品得到进一步分离[19]。高效液相色谱法是根据分离物质的疏水性不同，各组分之间相互影响进而能够在分离柱中得到分离[20]。Hatanaka等[21]将两种方法联用，即凝胶层析后的样品进行高效液相色谱分离，对不同峰值的样品收集后进行纯化，得到活性最强的一组分离肽。Geng等[5]在研究松茸和三色雷蘑ACE抑制肽的分离纯化时，先将松茸样品分别使用5 kDa和10 kDa的滤膜进行过滤，再进行ACE抑制率的检测，检测结果显示经过5 kDa过滤后的样品表现出更好的ACE抑制活性，并将过滤后的样品先后通过Mono-Q阴离子交换柱层柱和Superdex peptide凝胶过滤层析，得到的样品与标准蛋白样品进行比对，发现ACE抑制肽的相对分子质量大约是800 Da。
LC-MS/MS是鉴定ACE抑制肽常用的方法之一。Lau等[22]利用该方法鉴定了从不同食用菌中提取得到的8种功能较强的ACE抑制肽，经与其它食用菌中分离的ACE抑制肽对比，发现序列为AHEPVK、RIGLF和PSSNK的肽具有较低的IC50值，分别为63、116、29 mg/mL；序列为AHEPVK和RIGLF的肽是ACE竞争性抑制剂；序列为PSSNK的肽是非竞争性抑制剂，在消化后表现出较高的ACE抑制活性，可以作为生产抗高血压补充剂的理想成分。
3 ACE抑制肽活性检测方法
3.1 体外检测
Cushman等[23]建立的紫外分光光度法是最早也是最广泛使用的ACE抑制肽活性的体外检测方法。它的工作原理是利用血管紧张素Ⅰ的模拟物马尿酰组氨酰亮氨酸(Hip-His-Leu，HHL)与ACE反应生成马尿酸(血管紧张素Ⅱ的模拟物)，后加入ACE抑制肽(可减少马尿酸生成量)，加入前、后分别使用紫外分光光度计测定马尿酸生成量，对比分析得出ACE抑制肽的抑制活性。但在实际操作中，使用紫外分光光度计法检测ACE抑制活性，会出现不是因为ACE作用生成的马尿酸，这样多出来的马尿酸会对试验结果产生影响。
高效液相色谱法[24]是在紫外分光光度法的基础上将HHL与马尿酸分离后再进行紫外分光光度检测。选择高效液相色谱分离后的产物再进行紫外分光光度法检测，相对减少试验误差，精确度较高，结果更准确。赵元晖等[25]在该方法的基础上进行改良，进一步减少了马尿酸在紫外228 nm处的检测误差，提高了精确度。
可见光分光光度计法原理为血管紧张素Ⅰ模拟物呋喃丙烯酰三肽(FAPhe-Gly-Gly)，在ACE的作用下转化为血管紧张素Ⅱ模拟物氨基酸(FA-Phe，FAP)和二肽(Gly-Gly，GG)。在该过程中加入ACE抑制肽能够抑制血管紧张素Ⅰ模拟物向血管紧张素Ⅱ模拟物的转换，再利用分光光度计检测生成的血管紧张素Ⅱ模拟物的含量来确定ACE活性，依次来推断出ACE抑制肽的抑制率[26]。
何海伦等[27]借助毛细管电泳法简化了传统试验中需要多次进行分光光度计测量的情况，仅需在马尿酸与ACE反应完全后，将样品加入到毛细管中进行电泳分析就可得到试验结果，该试验方法方便快捷。
建议多种检测方法并用，从而尽可能减小不同检测方法可能带来的误差。
3.2 体内活性检测
ACE抑制肽的体内活性检测方法通常使用动物进行活体试验。模型动物一般为原发性或是继发性高血压大鼠。原发性高血压模型是以原发性高血压大鼠为试验对象，检测给药前后大鼠血压的变化来推断ACE抑制肽的活性[28]。继发性高血压模型是以人为手段造成高血压症状的大鼠为试验对象进行短期或长期的观察，给药的方式也分为短期的一次性或者是长期的每天或每周的连续给药[29]。
4 ACE抑制肽功效特性及构象关系
ACE抑制肽通常具有2～12个氨基酸的短链肽。晶体学研究表明任何肽都不能与ACE的活性位点结合。在某些情况下，长链肽具有ACE抑制活性，而氨基酸的类型可能比肽的长度更重要，这与氨基酸组成有关。当肽链中含有高酸性氨基酸(Asp和Glu)时，肽链显示净负电荷，能够与锌原子结合[30]。与锌原子结合后的肽链具有抑制活性，参与哺乳动物的血压调节，分布在哺乳动物身体各处。ACE抑制肽的C末端或N末端具有特定的氨基酸残基，其中酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸和精氨酸的存在对ACE结合影响很大[31]，C末端具有正电荷的氨基酸也影响肽的抑制作用[32]。
4.1 分子质量的影响
ACE抑制肽的分子质量与抑制效果具有一定相关性。研究人员发现，肽链较短的ACE抑制肽较肽链长的ACE抑制肽有更好的抑制效果[33]。王晶晶[34]发现分子质量小于3 kDa的抑制肽抑制效果最好，大于10 kDa的抑制效果较差。徐克寒等[35]发现ACE抑制肽中分子质量小于1 kDa的抑制肽抑制效果最好。
4.2氨基酸序列的影响
20世纪70年代，Ondetti等[36]发现ACE抑制肽C端的几个氨基酸对ACE抑制肽的抑制效果有重大影响。当ACE抑制肽的一级氨基酸中大量存在疏水氨基酸，同时C端带有正电荷的氨基酸、N端含有芳香族氨基酸时，ACE抑制肽的抑制活性较高。
4.3ACE抑制肽结构与抑制率的关系
Liu 等[37]和Pan 等[38]使用模拟分子对接的方法对ACE抑制肽的构效关系进行了研究，发现处在ACE抑制肽中心的氨基酸对ACE抑制肽的效果有重要影响，ACE与ACE抑制肽结合产生作用的位点也不相同。此外，彭剑秋等[39]还利用定量构效关系(quantitative structure activity relationship，QSAR)来进行ACE抑制肽构效关系的研究，进一步补充了抑制肽构效关系。
5 ACE抑制肽研究展望
食用菌源的ACE抑制肽，因其原料易得且降血压效果好正逐渐被大众接受。在相关研究中，ACE抑制肽的具体降血压机制受到多方面的影响，包括ACE抑制肽的来源、提取方式以及活性多肽的结构等。近年来越来越多的研究，使得我们对于食用菌ACE抑制肽有了更加详细的了解，但对于它的具体作用机制尚不明确，仍需进行更加深入的探究。
[1] 苏茂松.高血压防治知识与健康行为对高血压患者的现状及影响分析[J].当代医学,2019,25(13):168-170.
[2] 张文杰，尚菲，秦雪雪，等.食源性血管紧张素转换酶抑制肽的降压作用及研究进展[J].中国食品工业,2017,6(6):54-57.
[3] Daskaya-Dikmen C, Yucetepe A, Karbancioglu-Guler F, et al. Angiotensin-I-co
nverting enzyme (ACE)-inhibitory peptides from plants[J]. Nutrients, 2017, 9(4): 316.
[4] Geng X, Tian G, Zhang W, et al. ATricholomamatsutakepeptide with angiotensin co
nverting enzyme inhibitory and antioxidative activities and antihypertensive effects in spo
ntaneously hypertensive rats[J]. Scientific Reports, 2016, 6: 24130.
[5] Geng X, Tian G, Zhang W, et al. Isolation of an angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory protein with antihypertensive effect in spo
ntaneously hypertensive rats from the edible wild mushroomLeucopaxillustricolor[J]. Molecules, 2015, 20(6): 10141-10153.
[6] Campos L A, Bader M, Baltatu O C. Angiotensin-encyclopedia of stress[M]//Fink G. Stress: neuroendocrinology and neurobiology. Cambridge:Academic Press,2016, 2: 237-241.
[7] Paiva L, Lima E, Neto A I, et al. Isolation and characterization of angiotensin I-co
nverting enzyme (ACE) inhibitory peptides fromUlvarigidaC. Agardh protein hydrolysate[J]. Journal of Functio
nal Foods, 2016, 26:65-76.
[8] Kang M G, Kim Y H, Bolormaa Z, et al. Characterization of an antihypertensive angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory peptide from the edible mushroomHypsizygusmarmoreus[J]. BioMed Research International, 2013, 2013:283964.
[9] Tran H B, Yamamoto A, Matsumoto S, et al. Hypotensive effects and angiotensin-co
nverting enzyme inhibitory peptides of reishi (Ganodermalingzhi) auto-digested extract[J]. Molecules, 2014, 19(9):13473-13485.
[10] 伍善广, 孙红娜, 孙建华, 等. 茶树菇中降压活性蛋白提取工艺优化[J]. 南方医科大学学报, 2010, 30(6):1264-1267.
[11] 孙红娜. 茶树菇降血压活性肽的提取分离研究[D]. 南宁:广西大学, 2008.
[12] 金秋阳, 刘鑫宇, 胡晶红. 蛋白质的提取、分离与纯化研究进展[J]. 山东化工, 2017, 46(14):35-38.
[13] Zhang P, Roytrakul S, Sutheerawattanano
nda M. Production and purification of glucosamine and angiotensin-I co
nverting enzyme (ACE) inhibitory peptides from mushroom hydrolysates[J]. Journal of Functio
nal Foods, 2017, 36:72-83.
[14] 杨楠, 白剑. 蛋白质分离纯化技术研究进展[J]. 世界最新医学信息文摘, 2017, 17(A1):24-25.
[15] Ansor N M, Abdullah N, Aminudin N. Anti-angiotensin co
nverting enzyme (ACE) proteins from mycelia ofGanodermalucidum(Curtis) P. Karst[J]. BMC Complementary and Alternative Medicine, 2013, 13: 256.
[16] 卢忠英, 陈仕学, 姚元勇, 等. 蛋白质分离纯化方法的研究进展[J]. 广州化工, 2015, 43(17):12-13, 27.
[17] Jang J H, Jeong S C, Kim J H, et al. Characterisation of a new antihypertensive angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory peptide fromPleurotuscornucopiae[J]. Food Chemistry, 2011, 127(2):412-418.
[18] 韩宇. 超声波辅助酶法制备绿豆ACE抑制肽的研究[D]. 长春:吉林农业大学, 2014.
[19] 安传相. 核桃源蛋白ACE抑制肽制备及分离纯化的研究[D]. 贵阳:贵州大学, 2018.
[20] 陈飞平. 苋籽ACE抑制肽的分离纯化及其性质评价[D]. 重庆:西南大学, 2013.
[21] Hatanaka A, Miyahara H, Suzuki K I, et al. Isolation and identification of antihypertensive peptides from antarctic krill tail meat hydrolysate[J]. Journal of Food Science, 2009, 74(4): 116-120.
[22] Lau C C, Abdullah N, Shuib A S, et al. Novel angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory peptides derived from edible mushroomAgaricusbisporus(J.E. Lange) Imbach identified by LC-MS/MS[J]. Food Chemistry, 2014, 148:396-401.
[23] Cushman D W, Cheung H S. Spectrophotometric assay and properties of the angiotensin-co
nverting engyme of rabbit lung[J]. Biochemical Pharmacology, 1971, 20(7):1637-1648.
[24] 徐榕榕, 陶冠军, 李进伟, 等. 高效液相色谱测定血管紧张素转换酶抑制肽的活性[J]. 河南工业大学学报(自然科学版), 2005，26(4):18-21.
[25] 赵元晖, 李八方, 刘艺杰, 等. 食源性ACE抑制肽体外活性检测方法的改进及应用[J]. 中国海洋药物杂志, 2009, 28(4):5-8.
[26] 高丹丹,曹郁生,麦曦.改进的分光光度计法测定食源性多肽血管紧张素转化酶的抑制活性[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2011,37(2):219-223.
[27] 何海伦, 陈秀兰, 孙彩云, 等. 血管紧张素转化酶抑制肽的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2004, 24(9):7-11.
[28] Hagiwara S Y, Takahashi M, Shen Y, et al. A phytochemical in the edible Tamogi-take mushroom (Pleurotuscornucopiae), D-mannitol, inhibits ACE activity and lowers the blood pressure of spo
ntaneously hypertensive rats[J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2005, 69(8): 1603-1605.
[29] 孙勤, 陈季旺, 夏文水, 等. 食品蛋白源ACE抑制肽的生理和生化性质[J]. 武汉工业学院学报, 2009, 28(1):27-31.
[30] Aluko R E. Structure and function of plant protein-derived antihypertensive peptides[J]. Current Opinion in Food Science, 2015, 4:44-50.
[31] Gu Y, Wu J. LC-MS/MS coupled with QSAR modeling in characterising of angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory peptides from soybean proteins[J]. Food Chemistry, 2013, 141(3): 2682-2690.
[32] Iwaniak A, Minkiewicz P, Darewicz M. Food-originating ACE inhibitors, including antihypertensive peptides, as preventive food compo
nents in blood pressure reduction[J]. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2014, 13(2):114-134.
[33] Recio I. Dairy peptides: production, bioavailability and health benefits[C]// II Co
ngreso Internacio
nal de Alimentos Funcio
nalesy Nutracéuticos, 2016.
[34] 王晶晶. 远东拟沙丁鱼ACE抑制肽的研究[D]. 湛江:广东海洋大学, 2016.
[35] 徐克寒, 申铉日, 陈国华. 三斑海马蛋白肽ACE抑制活性的研究[J]. 食品工业科技, 2015, 36(15):96-99.
[36] o
ndetti M, Rubin B, Cushman D. Design of specific inhibitors of angiotensin-co
nverting enzyme: new class of orally active antihypertensive agents[J]. Science, 1977, 196(4288):441-444.
[37] Liu R, Zhu Y, Chen J, et al. Characterization of ACE inhibitory peptides fromMactraveneriformishydrolysate by nano-liquid chromatography electrospray io
nization mass spectrometry (Nano-LC-ESI-MS) and molecular docking[J]. Marine Drugs, 2014, 12(7): 3917-3928.
[38] Pan D, Cao J, Guo H, et al. Studies on purification and the molecular mechanism of a novel ACE inhibitory peptide from whey protein hydrolysate[J]. Food Chemistry, 2012, 130(1): 121-126.
[39] 彭剑秋.ACE抑制肽定量构效关系研究[D]. 上海:上海理工大学, 2012.
全球十大死亡原因中头号死亡杀手为心血管疾病。中国心血管患病人数约2.9亿，其中高血压患者占比最大，且年轻化趋势明显[1]。高血压疾病的发病因素不同，但原发性高血压可以借助食物中的某些蛋白质及多肽来进行调控。食物中能起到降血压作用的蛋白质及多肽被称为血管紧张素转换酶(ACE抑制肽)[2]。ACE通过将血管紧张素Ⅰ转换为血管紧张素Ⅱ引起血管收缩，进而使血压升高，ACE抑制肽就是通过抑制血管紧张素的转换过程来降低血压[3]。我国食用菌产量连年增长，种类繁多，资源丰富。近年的研究发现，食用菌中的功能活性成分可对人体健康产生积极影响，特别是在降血压、抗氧化等方面表现突出。目前，科研人员已证实该活性成分为ACE抑制肽，并对多种食用菌中该物质含量、功效以及提取方法进行了研究[4]。本研究从食用菌源ACE抑制肽的作用机制、制备工艺、活性检测以及构效关系等方面进行综述，以期为进一步研究和开发该物质提供参考。1 ACE抑制肽的作用机制生物体的血压调节机制从肾素-血管紧张素系统(RAS)中的血管紧张素元开始。血管紧张素元在肾素的作用下转化成血管紧张素Ⅰ，血管紧张素Ⅰ在血管紧张素转换酶(ACE)的作用下转化成血管紧张素Ⅱ进而引起血管收缩，同时引起醛固酮的释放，作用于远曲小管和集合管，使其增加对Na+和水的吸收，引起血压升高[5]。在激肽释放酶-激肽系统(KKS)中，激肽原在激肽释放酶的作用下转化成激肽，而激肽在ACE的作用下转化成无活性片段使血管收缩、血压升高，而 ACE抑制肽能够将形成的激肽转变成缓激肽进而降低血压[6]。2 食用菌ACE抑制肽的提取与分离鉴定2.1 提取方法2.1.1 水提法 该法是提取食用菌中ACE抑制肽的常用方法[7-11]。稀盐溶液和缓冲液对蛋白质或肽类稳定性好，溶解度大。用水提法提取ACE抑制肽时，应注意控制料水比、pH值和温度等因素，从而显著提高得率[10,11]。研究者多以大白口蘑[7]、蟹味菇[8]、茶树菇[9，10]、灵芝[11]等栽培食用菌和灰树花、双色牛肝菌等野生食用菌为原料，采用水提法得到ACE抑制肽粗提物后进行分离提纯，所得ACE抑制肽提取率较高，降血压效果理想。2.1.2 硫酸水解法 该法属于酸水解法的一种，是利用不同样品中蛋白质等电点的不同，通过使用硫酸等试剂将样品溶液调至所需蛋白的等电点附近形成沉淀后析出的方法[11，12]。Zhang等[13]以五种蘑菇为原料，采用硫酸水解法制备ACE抑制肽，发现平菇水解物对ACE的抑制效果最好(IC50=64.11 mg/mL)；采用四步纯化法纯化出的ACE抑制肽均表现出良好的抗热、抗酸碱和易于体外消化的特性。2.1.3 硫酸铵沉淀法 多肽在高浓度盐存在时发生凝聚并析出沉淀，使用高浓度的硫酸铵盐提取ACE抑制肽时，将pH值控制在一定范围内可提高提取率，并通过超滤等操作来分离纯化出ACE抑制肽[14]。Ansor等[15]使用硫酸铵沉淀法制备灵芝中的ACE抑制肽，将沉淀得到的粗蛋白进行反向液相色谱(RP-HPLC)分离ACE抑制肽并检测其活性，结果显示ACE抑制肽抑制率IC50值为1.13 mg/mL。2.1.4 甲醇提取法 该法属于有机溶剂提取法的一种，可使样品中ACE抑制肽溶解度降低，形成沉淀后析出[16]。Jang等[17]以侧耳菌为原料，以甲醇提取法提取ACE抑制肽，在经过超滤、Sephadex G-25柱层析、连续C18和SCX固相萃取以及反相HPLC纯化后，得到两种纯化的ACE抑制肽，同时对ACE抑制肽的抗血压活性进行了研究，IC50值分别为0.46、1.14 mg/mL，分子量分别为1 622.85、2 037.26 Da，在原发性高血压小鼠体内表现出显著的降血压功效。2.2 ACE抑制肽的分离鉴定在进行ACE抑制肽的分离纯化时，通常采用超滤法、凝胶层析法以及高效液相色谱法联用的方式。超滤法是利用超滤膜的孔隙，将不同分子量的物质进行分离[18]。凝胶层析法是利用凝胶颗粒小孔吸附分子质量不同的物质，质量小于凝胶颗粒小孔的被吸附，分子质量大的物质先被洗脱出来，被凝胶吸附的物质后被洗脱，样品得到进一步分离[19]。高效液相色谱法是根据分离物质的疏水性不同，各组分之间相互影响进而能够在分离柱中得到分离[20]。Hatanaka等[21]将两种方法联用，即凝胶层析后的样品进行高效液相色谱分离，对不同峰值的样品收集后进行纯化，得到活性最强的一组分离肽。Geng等[5]在研究松茸和三色雷蘑ACE抑制肽的分离纯化时，先将松茸样品分别使用5 kDa和10 kDa的滤膜进行过滤，再进行ACE抑制率的检测，检测结果显示经过5 kDa过滤后的样品表现出更好的ACE抑制活性，并将过滤后的样品先后通过Mono-Q阴离子交换柱层柱和Superdex peptide凝胶过滤层析，得到的样品与标准蛋白样品进行比对，发现ACE抑制肽的相对分子质量大约是800 Da。LC-MS/MS是鉴定ACE抑制肽常用的方法之一。Lau等[22]利用该方法鉴定了从不同食用菌中提取得到的8种功能较强的ACE抑制肽，经与其它食用菌中分离的ACE抑制肽对比，发现序列为AHEPVK、RIGLF和PSSNK的肽具有较低的IC50值，分别为63、116、29 mg/mL；序列为AHEPVK和RIGLF的肽是ACE竞争性抑制剂；序列为PSSNK的肽是非竞争性抑制剂，在消化后表现出较高的ACE抑制活性，可以作为生产抗高血压补充剂的理想成分。3 ACE抑制肽活性检测方法3.1 体外检测Cushman等[23]建立的紫外分光光度法是最早也是最广泛使用的ACE抑制肽活性的体外检测方法。它的工作原理是利用血管紧张素Ⅰ的模拟物马尿酰组氨酰亮氨酸(Hip-His-Leu，HHL)与ACE反应生成马尿酸(血管紧张素Ⅱ的模拟物)，后加入ACE抑制肽(可减少马尿酸生成量)，加入前、后分别使用紫外分光光度计测定马尿酸生成量，对比分析得出ACE抑制肽的抑制活性。但在实际操作中，使用紫外分光光度计法检测ACE抑制活性，会出现不是因为ACE作用生成的马尿酸，这样多出来的马尿酸会对试验结果产生影响。高效液相色谱法[24]是在紫外分光光度法的基础上将HHL与马尿酸分离后再进行紫外分光光度检测。选择高效液相色谱分离后的产物再进行紫外分光光度法检测，相对减少试验误差，精确度较高，结果更准确。赵元晖等[25]在该方法的基础上进行改良，进一步减少了马尿酸在紫外228 nm处的检测误差，提高了精确度。可见光分光光度计法原理为血管紧张素Ⅰ模拟物呋喃丙烯酰三肽(FAPhe-Gly-Gly)，在ACE的作用下转化为血管紧张素Ⅱ模拟物氨基酸(FA-Phe，FAP)和二肽(Gly-Gly，GG)。在该过程中加入ACE抑制肽能够抑制血管紧张素Ⅰ模拟物向血管紧张素Ⅱ模拟物的转换，再利用分光光度计检测生成的血管紧张素Ⅱ模拟物的含量来确定ACE活性，依次来推断出ACE抑制肽的抑制率[26]。何海伦等[27]借助毛细管电泳法简化了传统试验中需要多次进行分光光度计测量的情况，仅需在马尿酸与ACE反应完全后，将样品加入到毛细管中进行电泳分析就可得到试验结果，该试验方法方便快捷。建议多种检测方法并用，从而尽可能减小不同检测方法可能带来的误差。3.2 体内活性检测ACE抑制肽的体内活性检测方法通常使用动物进行活体试验。模型动物一般为原发性或是继发性高血压大鼠。原发性高血压模型是以原发性高血压大鼠为试验对象，检测给药前后大鼠血压的变化来推断ACE抑制肽的活性[28]。继发性高血压模型是以人为手段造成高血压症状的大鼠为试验对象进行短期或长期的观察，给药的方式也分为短期的一次性或者是长期的每天或每周的连续给药[29]。4 ACE抑制肽功效特性及构象关系ACE抑制肽通常具有2～12个氨基酸的短链肽。晶体学研究表明任何肽都不能与ACE的活性位点结合。在某些情况下，长链肽具有ACE抑制活性，而氨基酸的类型可能比肽的长度更重要，这与氨基酸组成有关。当肽链中含有高酸性氨基酸(Asp和Glu)时，肽链显示净负电荷，能够与锌原子结合[30]。与锌原子结合后的肽链具有抑制活性，参与哺乳动物的血压调节，分布在哺乳动物身体各处。ACE抑制肽的C末端或N末端具有特定的氨基酸残基，其中酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸和精氨酸的存在对ACE结合影响很大[31]，C末端具有正电荷的氨基酸也影响肽的抑制作用[32]。4.1 分子质量的影响ACE抑制肽的分子质量与抑制效果具有一定相关性。研究人员发现，肽链较短的ACE抑制肽较肽链长的ACE抑制肽有更好的抑制效果[33]。王晶晶[34]发现分子质量小于3 kDa的抑制肽抑制效果最好，大于10 kDa的抑制效果较差。徐克寒等[35]发现ACE抑制肽中分子质量小于1 kDa的抑制肽抑制效果最好。4.2氨基酸序列的影响20世纪70年代，Ondetti等[36]发现ACE抑制肽C端的几个氨基酸对ACE抑制肽的抑制效果有重大影响。当ACE抑制肽的一级氨基酸中大量存在疏水氨基酸，同时C端带有正电荷的氨基酸、N端含有芳香族氨基酸时，ACE抑制肽的抑制活性较高。4.3ACE抑制肽结构与抑制率的关系Liu 等[37]和Pan 等[38]使用模拟分子对接的方法对ACE抑制肽的构效关系进行了研究，发现处在ACE抑制肽中心的氨基酸对ACE抑制肽的效果有重要影响，ACE与ACE抑制肽结合产生作用的位点也不相同。此外，彭剑秋等[39]还利用定量构效关系(quantitative structure activity relationship，QSAR)来进行ACE抑制肽构效关系的研究，进一步补充了抑制肽构效关系。5 ACE抑制肽研究展望食用菌源的ACE抑制肽，因其原料易得且降血压效果好正逐渐被大众接受。在相关研究中，ACE抑制肽的具体降血压机制受到多方面的影响，包括ACE抑制肽的来源、提取方式以及活性多肽的结构等。近年来越来越多的研究，使得我们对于食用菌ACE抑制肽有了更加详细的了解，但对于它的具体作用机制尚不明确，仍需进行更加深入的探究。参 考 文 献：[1] 苏茂松.高血压防治知识与健康行为对高血压患者的现状及影响分析[J].当代医学,2019,25(13):168-170.[2] 张文杰，尚菲，秦雪雪，等.食源性血管紧张素转换酶抑制肽的降压作用及研究进展[J].中国食品工业,2017,6(6):54-57.[3] Daskaya-Dikmen C, Yucetepe A, Karbancioglu-Guler F, et al. Angiotensin-I-co
nverting enzyme (ACE)-inhibitory peptides from plants[J]. Nutrients, 2017, 9(4): 316.[4] Geng X, Tian G, Zhang W, et al. ATricholomamatsutakepeptide with angiotensin co
nverting enzyme inhibitory and antioxidative activities and antihypertensive effects in spo
ntaneously hypertensive rats[J]. Scientific Reports, 2016, 6: 24130.[5] Geng X, Tian G, Zhang W, et al. Isolation of an angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory protein with antihypertensive effect in spo
ntaneously hypertensive rats from the edible wild mushroomLeucopaxillustricolor[J]. Molecules, 2015, 20(6): 10141-10153.[6] Campos L A, Bader M, Baltatu O C. Angiotensin-encyclopedia of stress[M]//Fink G. Stress: neuroendocrinology and neurobiology. Cambridge:Academic Press,2016, 2: 237-241.[7] Paiva L, Lima E, Neto A I, et al. Isolation and characterization of angiotensin I-co
nverting enzyme (ACE) inhibitory peptides fromUlvarigidaC. Agardh protein hydrolysate[J]. Journal of Functio
nal Foods, 2016, 26:65-76.[8] Kang M G, Kim Y H, Bolormaa Z, et al. Characterization of an antihypertensive angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory peptide from the edible mushroomHypsizygusmarmoreus[J]. BioMed Research International, 2013, 2013:283964.[9] Tran H B, Yamamoto A, Matsumoto S, et al. Hypotensive effects and angiotensin-co
nverting enzyme inhibitory peptides of reishi (Ganodermalingzhi) auto-digested extract[J]. Molecules, 2014, 19(9):13473-13485.[10] 伍善广, 孙红娜, 孙建华, 等. 茶树菇中降压活性蛋白提取工艺优化[J]. 南方医科大学学报, 2010, 30(6):1264-1267.[11] 孙红娜. 茶树菇降血压活性肽的提取分离研究[D]. 南宁:广西大学, 2008.[12] 金秋阳, 刘鑫宇, 胡晶红. 蛋白质的提取、分离与纯化研究进展[J]. 山东化工, 2017, 46(14):35-38.[13] Zhang P, Roytrakul S, Sutheerawattanano
nda M. Production and purification of glucosamine and angiotensin-I co
nverting enzyme (ACE) inhibitory peptides from mushroom hydrolysates[J]. Journal of Functio
nal Foods, 2017, 36:72-83.[14] 杨楠, 白剑. 蛋白质分离纯化技术研究进展[J]. 世界最新医学信息文摘, 2017, 17(A1):24-25.[15] Ansor N M, Abdullah N, Aminudin N. Anti-angiotensin co
nverting enzyme (ACE) proteins from mycelia ofGanodermalucidum(Curtis) P. Karst[J]. BMC Complementary and Alternative Medicine, 2013, 13: 256.[16] 卢忠英, 陈仕学, 姚元勇, 等. 蛋白质分离纯化方法的研究进展[J]. 广州化工, 2015, 43(17):12-13, 27.[17] Jang J H, Jeong S C, Kim J H, et al. Characterisation of a new antihypertensive angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory peptide fromPleurotuscornucopiae[J]. Food Chemistry, 2011, 127(2):412-418.[18] 韩宇. 超声波辅助酶法制备绿豆ACE抑制肽的研究[D]. 长春:吉林农业大学, 2014.[19] 安传相. 核桃源蛋白ACE抑制肽制备及分离纯化的研究[D]. 贵阳:贵州大学, 2018.[20] 陈飞平. 苋籽ACE抑制肽的分离纯化及其性质评价[D]. 重庆:西南大学, 2013.[21] Hatanaka A, Miyahara H, Suzuki K I, et al. Isolation and identification of antihypertensive peptides from antarctic krill tail meat hydrolysate[J]. Journal of Food Science, 2009, 74(4): 116-120.[22] Lau C C, Abdullah N, Shuib A S, et al. Novel angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory peptides derived from edible mushroomAgaricusbisporus(J.E. Lange) Imbach identified by LC-MS/MS[J]. Food Chemistry, 2014, 148:396-401.[23] Cushman D W, Cheung H S. Spectrophotometric assay and properties of the angiotensin-co
nverting engyme of rabbit lung[J]. Biochemical Pharmacology, 1971, 20(7):1637-1648.[24] 徐榕榕, 陶冠军, 李进伟, 等. 高效液相色谱测定血管紧张素转换酶抑制肽的活性[J]. 河南工业大学学报(自然科学版), 2005，26(4):18-21.[25] 赵元晖, 李八方, 刘艺杰, 等. 食源性ACE抑制肽体外活性检测方法的改进及应用[J]. 中国海洋药物杂志, 2009, 28(4):5-8.[26] 高丹丹,曹郁生,麦曦.改进的分光光度计法测定食源性多肽血管紧张素转化酶的抑制活性[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2011,37(2):219-223.[27] 何海伦, 陈秀兰, 孙彩云, 等. 血管紧张素转化酶抑制肽的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2004, 24(9):7-11.[28] Hagiwara S Y, Takahashi M, Shen Y, et al. A phytochemical in the edible Tamogi-take mushroom (Pleurotuscornucopiae), D-mannitol, inhibits ACE activity and lowers the blood pressure of spo
ntaneously hypertensive rats[J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 2005, 69(8): 1603-1605.[29] 孙勤, 陈季旺, 夏文水, 等. 食品蛋白源ACE抑制肽的生理和生化性质[J]. 武汉工业学院学报, 2009, 28(1):27-31.[30] Aluko R E. Structure and function of plant protein-derived antihypertensive peptides[J]. Current Opinion in Food Science, 2015, 4:44-50.[31] Gu Y, Wu J. LC-MS/MS coupled with QSAR modeling in characterising of angiotensin I-co
nverting enzyme inhibitory peptides from soybean proteins[J]. Food Chemistry, 2013, 141(3): 2682-2690.[32] Iwaniak A, Minkiewicz P, Darewicz M. Food-originating ACE inhibitors, including antihypertensive peptides, as preventive food compo
nents in blood pressure reduction[J]. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2014, 13(2):114-134.[33] Recio I. Dairy peptides: production, bioavailability and health benefits[C]// II Co
ngreso Internacio
nal de Alimentos Funcio
nalesy Nutracéuticos, 2016.[34] 王晶晶. 远东拟沙丁鱼ACE抑制肽的研究[D]. 湛江:广东海洋大学, 2016.[35] 徐克寒, 申铉日, 陈国华. 三斑海马蛋白肽ACE抑制活性的研究[J]. 食品工业科技, 2015, 36(15):96-99.[36] o
ndetti M, Rubin B, Cushman D. Design of specific inhibitors of angiotensin-co
nverting enzyme: new class of orally active antihypertensive agents[J]. Science, 1977, 196(4288):441-444.[37] Liu R, Zhu Y, Chen J, et al. Characterization of ACE inhibitory peptides fromMactraveneriformishydrolysate by nano-liquid chromatography electrospray io
nization mass spectrometry (Nano-LC-ESI-MS) and molecular docking[J]. Marine Drugs, 2014, 12(7): 3917-3928.[38] Pan D, Cao J, Guo H, et al. Studies on purification and the molecular mechanism of a novel ACE inhibitory peptide from whey protein hydrolysate[J]. Food Chemistry, 2012, 130(1): 121-126.[39] 彭剑秋.ACE抑制肽定量构效关系研究[D]. 上海:上海理工大学, 2012.
文章来源：食用菌学报 网址: http://syjxb.400nongye.com/lunwen/itemid-17883.shtml
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